RNA/DNA分離和RNA-DNA STAT 60的整個過程可以在90 min內(nèi)完成。這些是從同一樣品中提取RNA和DNA的有效方法。未降解RNA和DNA的回收 比任何其他等化方法大30-150%。
應(yīng)用
RNA-DNA STAT 60分離的總RNA/DNA為 用于Northern和Southern分析的是，斑點雜交，poly A + 選擇，體外反式ltio n，RNase保護分析，分子克隆，以及來自人，動物和植物的組織的polyme rase鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，沒有任何額外的RNase/DNase處理。這些簡單的單一試劑是我們的一大優(yōu)勢。使用本品時，RNA/DNA的回收效率較高 從小的生物樣本(biop sies etc.)中分離RNA/DNA。
試劑供應(yīng)
RNA STAT-60和DNA STAT-60
準(zhǔn)備：即用型。
儲存：2-8 ℃冷藏。
穩(wěn)定性：參見la bel上的失效日期。
需要但未提供的試劑
氯方（ACS級）、異丙醇（ACS級）和乙醇（ACS級）。
方案
通過RNA-DNA STAT 60方法分離RNA/DNA包括以下步驟：
在RNA STAT 60中均質(zhì)化
（1 ml/50-100 mg組織，或5-10 xI0 6ce lls）
RNA提?。?.2 mL氯芬/ml勻漿。
RNA精密度：0.5 mL異丙醇（歐洲藥典） ml 初始檢測中使用的RNA ST AT 60。
4 . RNA Was h: 75% ethanol
除非另有說明，否則該程序在室溫下進行。
均質(zhì)化：
組織：
Homogenize t iss ue samples in the RNA ST AT-60 (1ml
/根據(jù)50-IOOmg組織），置于玻璃-聚四氟乙烯或Polytron勻漿器中。 樣品 體積 應(yīng) 不 過量 所用RNA ST AT-60體積的l0% 用于均質(zhì)化。
細(xì)胞：
細(xì)胞 生長的 in 單眼 a重新裂解 凹凸的 in 通過加入RNA STAT-6 QTM(l ml/3.5 cm2 petri dis h)并通過細(xì)胞溶解物的培養(yǎng)皿。 I 0 - 20 時間 用吸管粗暴吸管。懸浮生長的細(xì)胞 是 沉淀，然后在 RNA ST AT-60TM ( l ml/ 5-JO x 106 ce lls） by 重復(fù)的 移液。 洗滌 皮膚 加入前 of 的 RNA STAT-6 QTM should be 避免 增加了RNA降解的可能性。
RNA延伸反應(yīng)：
使均質(zhì)化， 存儲 的 勻漿 te 針對 室溫下5 min，使其*解離 of 核蛋白 復(fù)合物。 下一步，添加 0.2 ml 氯方 依據(jù) ml of 的 RNA STAT-60™。 蓋上樣品蓋，用力搖晃 針對 1 5 秒 o nds和 le t檢驗 it s ta nd at 房間 溫度 針對 2-3 分鐘。離心機 的 勻漿 at 12,000g （大值） 針對 15分鐘 at 4° C.以下 離心 第e次勻漿 半配對 進入 二 階段： a 下限 紅酚氯方相和無色上層 水相。RNA在水相中保持著不透明的狀態(tài)，而DNA和 蛋白質(zhì)類 是 in 的 在三相和有機相中。溶液的體積 水 相 約為勻漿使用的RNA STAT-60TM體積的60%。
RNA沉淀：
傳輸 的 曲菌的 相 to a fres h 試管。 添加 0.5 ml異丙醇/ml或用于勻漿的RNA STAT-60TM 和 混合。 儲存 樣品 at 室溫下離心5-10 min at 1200 0g（大），10 min，4 °C。RNA沉淀（離心離子前不可見），因為在管底部有白色沉淀。
除去上清液，清洗RNA沉淀 一次 含75%乙醇 l by 渦旋 和 后續(xù) 以7.500g（大值）離心5 min 4° C. 添加 at 病變 I ml 75%乙醇/ml 的 RNA STAT-60TM 使用 對于初始均質(zhì)化。
程序結(jié)束時，短暫干燥RNA沉淀(5-10 min)。重要的是不要使RNA沉淀*干燥，因為它將大大 減少 it 溶解度。 請勿使用 用于干燥的Speed-Vac。溶解RNA 水或(l mM)EDTA中沉淀。pH 7?；?.5%SDS溶液。渦旋或使團塊通過 a 很少 次 通過 a 移液器吸頭。可能需要在55-60 ℃下孵育10-15 min以溶解RNA。經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)處理的無RNase溶液 be 使用 對于RNA的如此輕浮。
I. 對于少量細(xì)胞或組織(1-10 mg)的RNA同分異構(gòu)體：將樣品在0.8 mL tl1e RNA ST AT-6QTM中勻漿，將勻漿轉(zhuǎn)移至Eppendorf管中，并遵循isola ti on方案。RNA沉淀應(yīng)在-20 ℃下進行30 min的離子除外。需要添加載體r，如糖原。
RNA STAT-60TM co ntains the poiso n(pheno l)and the irritant(guan idiniu m).可能致命。當(dāng)使用RNA STAT-6 QTM時，使用手套和護目鏡（護罩、護目鏡）。請勿接觸皮膚或衣物。避免吸入蒸汽。同時閱讀藥瓶上的警告說明。請勿將RNA STAT-60TM暴露于強烈的酸性溶液中。
轉(zhuǎn)換器 的 水溶液 相 to a 新鮮的 管 和 混合 含異丙醇。每毫升加入0.5 mL異丙醇 of 的 使用的DNA STAT-60 針對 均質(zhì)化。 Sto re 樣品s at -20°C 30 min，離心機 12,000g （大值） 針對 LO 分鐘 4 °C下。DNA 沉淀 翅 小 澄清 to 白色 微丸 在底部 of 的 試管。 委托方 小樣本， 添加 of a 可能需要載體(g lycoge n)d。
DNA洗滌
除去上清液，用75%乙醇渦旋清洗DNA沉淀一次，隨后在4 ℃下以7,500g（多）離心5 min。按照1 mL 75%乙醇 ml of 的 DNA STAT-60 使用 針對 的 初始 同質(zhì)尼扎離子。
在程序結(jié)束時，通過風(fēng)干(5-10 min)干燥簡單的DNA團塊很重要，不要使團塊過度干燥，因為它將大大降低其如此的柔韌性。將DNA沉淀溶于水或1 mm edta(pH 8.Vo rtex)中或通過移液器吸頭使沉淀通過幾次?？赡苄枰?5-60 ℃下孵育10-15分鐘以溶解DNA樣品。
特殊處理注意事項
DNA STAT-60™含有刺激物(g ua nidinium) 并且可能是致命的。當(dāng)與 DNA STAT-60 使用 手套和護目鏡（護罩， 安全性 護目鏡）。請勿 得到 皮膚或衣服上。避免吸入蒸汽。閱讀瓶上的警告說明。請勿將DNA STAT-60暴露于酸性環(huán)境中。
參考文獻
I. Chomczynks I. P.和 Sacchi, 1987. 單步 方法 的RNA Iso化通過酸性胍硫氰酸銨-苯酚l氯方提取。生物技術(shù)8:14 8-1 49。
