CHOgro®滴度增強劑不會對轉染后的細胞生長和活力產生不利影響。FreeStyle™CHO-S細胞的一式三份培養(yǎng)瓶適于CHOgro®表達培養(yǎng)基與瞬時轉染跨 IT-PRO®轉染試劑(Mirus公司Bio公司)以1:1的試劑對DNA比率(體積:重量)和1μg每毫升培養(yǎng)物的質粒DNA為4 x 10 6在125毫升Optimum Growth燒瓶(25毫升/瓶,湯姆森儀器公司)中的細胞數/毫升。如所示,添加了CHOgro®Titer Enhancer,并且在將轉染復合物添加到培養(yǎng)液后立即將所有培養(yǎng)液轉移至32°C。轉染后每天使用Guava®easyCyte™5HT流式細胞儀(EMD Millipore)測量細胞計數(實線)和生存力(碘化丙啶染色,虛線)。
CHOgro®高產量表達系統可擴展1000倍。 人IgG1是通過用瞬時轉染產生的 反式 1試劑:DNA比IT-PRO®轉染試劑(Mirus公司Bio制)和每毫升培養(yǎng)液1微克質粒DNA在1。Freestyle CHO細胞(Thermo Fisher Scientific)以4 x 10 6的密度轉染 在以下體積/培養(yǎng)容器中的CHOgro®表達培養(yǎng)基(Mirus Bio)中的細胞數/ ml:2 ml /非組織培養(yǎng)物處理過的6孔培養(yǎng)皿,20 ml / 125 ml Thomson燒瓶,500 ml / 1.6 L Thomson燒瓶,2000 ml / 5 L湯姆森燒瓶。將所有培養(yǎng)物移至32°C,搖動,然后將轉染復合物和CHOgro®Titer Enhancer添加到培養(yǎng)物中。在其余的實驗中,將培養(yǎng)物保持在適當的搖動速度下。使用標準夾心人IgG ELISA分析第14天的上清液。誤差棒代表一式三份技術重復的標準偏差。
使用多個Fc融合構建體觀察到效價增強。使用兩種不同的Fc融合構建體瞬時轉染跨每毫升培養(yǎng)液:(重量體積)和1μg的質粒DNA試劑1到DNA比:以1 IT-PRO®轉染試劑(Mirus公司Bio公司)。將FreeStyle™CHO-S(ThermoFisher Scientific)細胞培養(yǎng)在CHOgro®表達培養(yǎng)基(Mirus Bio)中,并以4 x 10 6接種在未處理的6孔板中轉染時的細胞數/ ml(2 ml /孔)。如所指示的,添加了CHOgro®滴度增強劑,并且在將轉染復合物添加至培養(yǎng)物后立即將培養(yǎng)物轉移至32℃。使用標準的夾心人IgG ELISA分析第10天的上清液。誤差棒代表一式三份技術重復的標準偏差。
第三方使用CHOgro®高產量表達系統和CHOgro®滴度增強劑實現的更高滴度。Fc融合蛋白通過在完整CHOgro®媒體CHO-S細胞的瞬時轉染產生的使用反式(1:1試劑:DNA比率,體積:重量1)IT-PRO®轉染試劑。用于轉染的細胞為2 x 10 6細胞/ ml(無CHOgro®Titer Enhancer)或4 x 10 6(含CHOgro®Titer Enhancer)。轉染后24小時(無CHOgro®滴度增強劑)或立即(有CHOgro®滴度增強劑)將培養(yǎng)物轉移至32°C。產量代表轉染后第11天收獲的0.5 L培養(yǎng)物中的終親和純化蛋白。